果樹苗木微體嫁接脫毒技術(shù)

1.培育無病毒植株

微體嫁接是果樹苗木獲得無病毒苗木的方法之一。我國蘇琴 環(huán)等（1980)以金冠蘋果實生苗作砧木，以格瑞弗斯蘋果 莖尖分生組織作接穗進行試管嫁接，獲得無蘋果莖溝病毒的 蘋果植株。

進行嫁接親和力的研究

在人工控制的條件下，通過試管微體嫁接有助于進行砧 穗親和力的研究。具有親和力的接穗和砧木在嫁接時，愈和 的第一步是形成愈傷組織，很多研究者在進行試管微體嫁接 條件下，對各種砧木和接穗之間的親和力進行了研究，篩選 出親和力強的砧穗組合。

解決營養(yǎng)繁殖生根難的問題

某些營養(yǎng)繁殖難以生根的植物種類或品種，可以借助于 試管微體嫁接的方法，解決生根難的問題。例如格瑞弗斯蘋 果通過莖尖組織培養(yǎng)，可以獲得無病毒新梢，但不能生根， 只有通過嫁接才能獲得完整植株。

(二）微體嫁接的方法

以金冠品種蘋果實生苗作砧木，用MSA和MSB兩種培 養(yǎng)基。河5八是含0.8*瓊脂的固體培養(yǎng)基，供胚發(fā)芽用； MSB是液體培養(yǎng)基含有MS'無機鹽和維生素Bp添加7% 的蔗糖？11值為5.7，供接穗莖尖的分生組織生長用。將經(jīng) 過低溫層積處理的種子去掉種皮，用0.5^次氯酸鈉（含氯 10%)消毒1011^1，然后用無菌蒸餾水沖洗3次，接種于 ”5八培養(yǎng)基中，在25^黑暗條件下培養(yǎng)15天。然后將幼苗 的上胚軸和子葉去掉，移入平底試管（2.5cmxllcm)中， 試管內(nèi)帶一個中心有小孔的濾紙橋，將莖尖分生組織放在砧 木的下胚軸上，并與其維管組織密接。莖尖分生組織接穗, 可取自試管培養(yǎng)的新梢，也可以從田間取無菌新梢。嫁接后 將其置于每天161 4 000匕光照、27尤的溫度和811黑暗、 231條件下培養(yǎng)。

接種1周后接穗和砧木均產(chǎn)生愈傷組織并完全愈合，6 -50 -

周后接穗發(fā)育成具有4〜6葉片的新梢。這時即可移入無菌 的珍珠巖中，灌入肘58培養(yǎng)液，并蓋以燒杯保持濕度。移 栽后64內(nèi)，每天將燒杯口從一邊提高0.5(^，第七天去掉 燒杯，再經(jīng)過2天即可將幼苗移入消毒的土壤中，并放入溫 室內(nèi)生長。

(三）影響微體嫁接成活的因素

影響微體嫁接成活的因素主要是接穗的大小和取樣的時 間。試管內(nèi)嫁接成活的可能性與接穗的大小成正相關(guān)，而無 病毒植株的培育與接穗莖尖的大小成負(fù)相關(guān)。所以，為了獲 得無病毒植株，可以采用有2個葉原基的莖尖分生組織作接 穗。一年中不同時期從田間取樣作接穗嫁接的成活率也不 同。從11月份到3月份期間進行嫁接，成活率為10^; 5 月份進行嫁接成活率為70%，6〜10月份嫁接則每個月下降 10^。在采用離體培養(yǎng)的莖尖新梢作接穗時，成活率為 60*而與月份無關(guān)。

微體嫁接技術(shù)難度較大，不容易掌握，與實際應(yīng)用還有 相當(dāng)距離。但是，隨著對無病毒苗木需要量的不斷增加，預(yù) 計在不久的將來，微體嫁接技術(shù)像莖尖分生組織培養(yǎng)一樣， 將會有很大的發(fā)展。

六、抗病毒醚在果樹苗木脫毒中的應(yīng)用

抗病毒醚（Ribaririn)是一種對0\人或1^人具有廣譜 作用的人工合成核苷物質(zhì)。近年來的研究表明，在莖尖培養(yǎng) 和原生質(zhì)體培養(yǎng)中，在培養(yǎng)基內(nèi)加入抗病毒醚，能抑制病毒 復(fù)制，從感染病毒的分生組織可獲得無病毒馬鈴薯苗。用木 本植物也進行了一些試驗，脫除的果樹苗木病毒有葡萄扇葉病毒、蘋果褪綠葉、斑病毒等。

山家弘士（1986)為了探討抗病毒醚對脫除蘋果莖溝 病毒的效果，用加有抗病毒醚的培養(yǎng)基，對感染蘋果莖溝病 毒的試管苗進行培養(yǎng)。抗病毒醚的濃度為12.5pgAnU 25.0jjLg/ml,分別加入標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基（MS' BA)中，然后高 壓滅菌15mi&處理時間為401 80d和120d,結(jié)果表明， 25.0^#1^處理的試管苗稍有黃化，新梢增殖數(shù)減少，時間 越長，枯死的個體也越多；但12.5^^1^處理未觀察到明 顯藥害。在抗病毒醚殘效已經(jīng)消失的200(1和2404后，檢測 蘋果莖溝病毒的結(jié)果表明，加用抗病毒醚的培養(yǎng)基，繼代培 養(yǎng)80(1以上的試管苗，不管抗病毒醚濃度高低都脫除了病 毒。抗病毒醚對蘋果褪綠葉斑病毒、蘋果莖溝病毒，在蘋果 體內(nèi)都有抑制增殖效果。在加用抗病毒醚培養(yǎng)基中增殖的新 梢，其頂端部分在繼代培養(yǎng)過程中，逐漸脫除了病毒。其原 因是抗病毒醚作用于寄主的代謝方式，從而阻止病毒的 增殖。

丑虹1&3等在木本植物莖尖培養(yǎng)中曾使用抗病毒醚代替 熱處理，結(jié)果脫除了葡萄扇葉病毒。漢森等進行蘋果莖尖培 養(yǎng)時，用抗病毒醚抑制了蘋果褪綠葉斑病毒�？共《久褲舛� 為10Jxg/ml或20^^g/ml，2個月能有效地脫除所有枝條的蘋 果褪綠葉斑病毒。在此濃度下枝條生長未減少，僅偶爾有輕 微褪綠。用80^#1^抗病毒醚處理的所有枝條呈中毒現(xiàn)象， 而用40^8^^處理的枝條則表現(xiàn)輕微中毒。在生育期間噴 布抗病毒醚，可在苗木頂端部分，擴大無毒區(qū)域。

對于抗病毒醚的應(yīng)用效果，因病毒種類不同而有差異。 目前用此法脫除所有病毒，也是不可能的，在不久的將來， 如能開發(fā)出抗病毒的多種制劑，將為脫除病毒，提高無病毒 種苗的生產(chǎn)效率做出積極貢獻。