苗木培養(yǎng)材料的采集與消毒

苗木組織培養(yǎng)中各種用于接種培養(yǎng)的材料 稱為外植體。包括苗木體的各種器官、組織、細(xì) 胞和原生質(zhì)體等。組織培養(yǎng)所用的材料非常廣 泛，可采取根、莖、葉、花、芽和種子的子葉，有時(shí) 也利用花粉粒和花藥，其中根尖不易滅菌，一般 很少采用。

對(duì)于木本花卉來(lái)說(shuō)，闊葉樹(shù)可在一二年生的

枝條上采集，針葉樹(shù)種多采種子內(nèi)的子葉或胚

軸.草本苗木多采集莖尖。

在快速繁殖中，最常用的培養(yǎng)材料是莖尖， 通常切塊在0. 5 001左右，如果為培養(yǎng)無(wú)病毒苗 而采用的培養(yǎng)材料通常僅取莖尖的分生組織部 分，其長(zhǎng)度在0.111皿以下。

培養(yǎng)材料的滅菌

取來(lái)的材料雖經(jīng)選擇，外部總還有不少雜 菌，因此,接種前應(yīng)進(jìn)行表面滅菌。

①先將材料用流水沖洗干凈，最后一遍用 蒸餾水沖洗，再用無(wú)菌紗布或吸水紙將材料上的 水分吸干，并用消毒刀片切成小塊。

②在無(wú)菌環(huán)境中將材料放人70《酒精中浸 泡30〜60 So

③再將材料移人漂白粉的飽和液或0.01% 升汞水中消莓5〜10 min.

④取出后用無(wú)菌水沖洗三四次。

將已滅菡的材料，用無(wú)菌刀、剪、鑷等，在無(wú)

菌的環(huán)境下，剝?nèi)パ康镊[片、嫩枝的外皮和種皮 胚乳等，葉片則不需剝皮。然后切成0.2〜

5 0巾厚的小片，這就是外植體。在操作中嚴(yán) 禁用手觸動(dòng)材料。

4. 4. 2 接種

接種是指把經(jīng)過(guò)表面滅菌后的苗木材料切 碎或分離出器官、組織、細(xì)胞，轉(zhuǎn)放到無(wú)菌培養(yǎng) 基上的全部操作過(guò)程。整個(gè)過(guò)程均須無(wú)菌 操作。

①接種前先把接種室紫外燈打開(kāi)，照射滅 菌20〜30 !^⑴或提前0. 5〜1 d用髙錳酸鉀和 甲醛混合液熏蒸。接種臺(tái)要提前開(kāi)啟。

②操作人員進(jìn)人接種室前需用肥皂水洗手 滅菌，換上經(jīng)過(guò)消毒滅菌的白色工作服和拖鞋， 戴上工作帽和口罩。

③進(jìn)人接種室后用70《的酒精棉球擦拭雙 手、超凈工作臺(tái)和需放上工作.臺(tái)的所有器具，防 止交叉污染。‘

④點(diǎn)燃酒精燈，將接種鉤、剪刀、鑷子放人 不銹鋼盤(pán)或瓷盤(pán)內(nèi)燒灼，冷卻后備用。接種鉤、 剪刀、鑷子等不使用時(shí)浸泡在95‘冗的酒精中,用 時(shí)在火焰上滅菌，待冷卻后使用。每次使用前均 需進(jìn)行用具滅菌。

⑤將外植體放入經(jīng)燒灼滅菌的不銹鋼盤(pán)或 瓷盤(pán)內(nèi)處理。如外植體為莖段的，將莖段上的葉 柄和莖的上下端剪掉一小節(jié);培養(yǎng)脫毒苗的，在 雙筒解剖鏡下剝離切取大小0. 2〜0.‘3 mm時(shí)莖 尖分生組織。

⑥燒灼瓶口和塞子，將培養(yǎng)瓶?jī)A斜拿穩(wěn)，打 開(kāi)塞子，用鑷子將接種材料送人瓶?jī)?nèi)，用接種鉤 將材料壓人培養(yǎng)基中，燒灼瓶口和塞子,并上塞。 此過(guò)程中要注意避免細(xì)菌污染。-

4. 4. 3 培養(yǎng)

初代培養(yǎng)

將從苗木體上分離下來(lái)的部分進(jìn)行第一次 培養(yǎng)，稱初代培養(yǎng)，也稱誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)基由于 苗木種類的不同而不同，通常是?^5基本培養(yǎng)基 加人適量的苗木生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及其他成分。首先 在251下進(jìn)行暗培養(yǎng),待長(zhǎng)出愈傷組織后轉(zhuǎn)入 光培養(yǎng)。此階段主要誘導(dǎo)芽體解除休眠，恢復(fù) 生長(zhǎng)。

增殖培養(yǎng)

也稱繼代培養(yǎng)。外植體的增殖是組培的關(guān) 鍵階段,在新梢等形成后為了擴(kuò)大繁殖系數(shù)，需 要繼代培養(yǎng)。把材料分株或切段轉(zhuǎn)人增殖培養(yǎng) 基中，增殖培養(yǎng)基一般在分化培養(yǎng)基上加以改 良，以利于增殖率的提高。增殖一個(gè)月左右后， 可視情況進(jìn)行再增殖。為了防止變異或突變，通 常只繼代培養(yǎng)10〜12次。根據(jù)需要，一部分進(jìn) 行生根培養(yǎng)，一部分仍繼代培養(yǎng)，陸續(xù)供用。

繼代培養(yǎng)的接種過(guò)程與初代培養(yǎng)有兩點(diǎn)不同，一是不需要對(duì)接種材料進(jìn)行滅菌處理;二是在空間較大的培養(yǎng)瓶中接種，接種更方便。

生根培養(yǎng)

.繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽等一般沒(méi)有 根，必須轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。培養(yǎng) 基通常為1/2朋5培養(yǎng)基加人適量的苗木生長(zhǎng)調(diào) 節(jié)劑。切取增殖培養(yǎng)瓶中的無(wú)根苗，接種到生根 培養(yǎng)基上進(jìn)行誘根培養(yǎng)，一個(gè)月后即可獲得健壯 根系。有些易生根的苗木在繼代培養(yǎng)中通常會(huì)